實(shí)驗(yàn)樣品:本次實(shí)驗(yàn)樣品為水稻葉片,此次選用凈信多樣品組織研磨進(jìn)行前處理操作,提取RNA實(shí)驗(yàn)。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/span>植物核酸提取是一個(gè)通過簡易化、可操作性的手段獲取“pure” DNA和RNA的過程。植物組織越幼嫩新鮮所含的次生代謝產(chǎn)物越少,隨著植物組織的逐漸成熟,次生代謝產(chǎn)物的含量會(huì)逐漸增多。植物多糖理化性質(zhì)和核酸相似,在提取過程中容易和核酸一起沉淀,很難去除。如果去除不徹底,多糖抑制許多酶的活性,被多糖污染的核酸無法用于很多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。植物細(xì)胞不同于動(dòng)物細(xì)胞,有著厚厚的細(xì)胞壁。傳統(tǒng)方法破碎費(fèi)時(shí)費(fèi)力,效果差,且易出現(xiàn)交叉污染。Tissuelyser系列樣本制備儀用裂解珠碰撞法(beads-beating)能夠處理各種類型植物樣本,包括根、莖、葉、種子以及藻類等;可在數(shù)秒內(nèi)徹底破碎植物細(xì)胞膜和纖維素細(xì)胞壁且無交叉污染、核酸蛋白易降解等問題。
實(shí)驗(yàn)設(shè)備:
多樣品組織研磨儀 Tissuelyser-192L
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、準(zhǔn)備多樣品組織研磨儀-192L一臺(tái),96深孔板2塊,5mm研磨珠。
2、96深孔本以及適配器放入液氮冷凍。
3、將深孔板放入儀器內(nèi),旋緊螺帽。
4、按運(yùn)行鍵啟動(dòng),進(jìn)行樣品研磨。
5、研磨結(jié)束,關(guān)閉電源,將研磨罐從研磨倉取出,用開蓋工具打開蓋子,取出樣品即可。
實(shí)驗(yàn)對比圖:
樣本研磨前后效果圖
注意事項(xiàng):
1、按照樣品量來選擇研磨珠配比和參數(shù)設(shè)置,能達(dá)到最好的效果,有不清楚的及時(shí)問上海凈信銷售人員。
2、往適配器里放研磨管時(shí)注意平面配平,保證適配器壓蓋在水平線。
本次實(shí)驗(yàn)通過使用多樣品組織研磨儀Tissuelyser-192L對水稻葉片進(jìn)行研磨,并成功提取了RNA。實(shí)驗(yàn)過程中,我們深刻體會(huì)到了研磨儀在植物組織研磨和RNA提取方面的顯著優(yōu)勢。裂解珠碰撞法不僅能夠在短時(shí)間內(nèi)徹底破碎植物細(xì)胞壁,還避免了傳統(tǒng)方法中的費(fèi)時(shí)費(fèi)力、效果差以及交叉污染等問題。通過本次實(shí)驗(yàn),我們驗(yàn)證了該研磨儀在處理植物樣本、尤其是水稻葉片方面的有效性,并成功獲得了高質(zhì)量的RNA樣本。這為后續(xù)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)提供了有力的支持。同時(shí),我們也意識(shí)到在實(shí)驗(yàn)中合理設(shè)置研磨珠配比和參數(shù)的重要性,以及實(shí)驗(yàn)操作中的注意事項(xiàng),這將有助于我們更好地進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn),提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。